Actualité : Réunion consortium : démarrage de Projet - 22Septembre 2009 - 14h - ESPCI
Résumé : Le suivi de biomolécule unique permet de révéler des paramètres cruciaux sur des processus dynamiques, données non accessibles par des mesures d’ensemble, et qui donc constitue un enjeu majeur. La microscopie optique classique implique des études à des concentrations pico à nanomolaires, afin de pouvoir isoler des molécules uniques dans le volume d’observation. Ce confinement est également un atout déterminant pour l’étude d’hétérogénéités cellulaires sub-longueur d’onde jouant un rôle majeur dans de nombreux processus biologiques
Cependant, les conditions réalistes en milieu intracellulaire par exemple, imposent souvent des concentrations micromolaires, ce qui implique donc une réduction importante du volume d’observation conventionnel par trois ordre de grandeur.
Nous proposons une approche originale couplant la spectroscopie de corrélation de fluorescence (FCS), outil performant pour extraire des informations sur la dynamique de molécule unique, et les substrats plasmoniques nanostructurés induisant de fortes exaltationsde champ et un confinement sur leur surface. Ces singularités électromagnétiques à l’échelle du nanomètre, appelée « hotspot », sont liées aux propriétés optiques des plasmons de surface. Ils fournissent une excellente approche pour étudier la dynamique de molécule unique pour des concentrations élevées en réduisant de façon très importante le volume d’excitation et en augmentant le signal de fluorescence de plusieurs ordres de grandeur. Dans ce projet, les substrats nanostructurés seront obtenus à partie de faisceaux de fibres par des méthodes de wet-ech couverts par un film métallique fin. Cette technique est simple et
très reproductible. Elle permet de produire des surfaces « nanofakir » couvrant une large variété de topographie de surface, en ajustant la densité des hotspots, leur position et leur taille.
Le lien entre la morphologie du film et la carte de fluorescence sera étudiée en détails via des simulations et des études expérimentales de microscopie de fluorescence sous excitation biphotonique ou d’imagerie de durée de vie de fluorescence. Afin d’améliorer l’acquisition, nous étudierons également la possibilité de paralléliser la mesure FCS en plusieurs hotspot, ceci étant permit grâce à la forte exaltation liée à la nature des substrats. Les performances prometteuses de cette nouvelle technique d’imagerie seront démontrées par son application à l’étude d’un problème biologique majeur. La concentration du cholesterol est maintenant bien connue pour jouer un rôle majeur dans la maladie d’Alzheimer mais les interactions en jeu ne sont pas encore comprises. Les structures lipidiques nanométriques appelées radeaux lipidiques sont ainsi supposées un rôle très important. En permettant de suivi dynamique des molécules uniques à l’échelle nanométrique, la FCS-hotspot devrait apporter des réponses majeures à cette problématique.
Partenaires :
Centre d’Imagerie Plasmonique Appliquées
Institut Langevin, ESPCI ParisTech,
Resp. : Samuel Grésillon et Emmanuel Fort
e-mail : 
/ 
CNRS UMR 7587, Université Paris Diderot,
10 rue Vauquelin, 75 231 Paris Cedex 05, France.
Laboratoire de Photophysique Moléculaire
et Centre de photonique Biomédical
Université d’Orsay
Resp. : Sandrine Leveque-Fort
e-mail : 
www.ppm.u-psud.fr/biophotonique
Centre de Recherche de l’Institut du Cerveau et de la Moëlle EpinièreUPMC/Inserm UMR_S 975 ; CNRS UMR 7225
Hôpital de la Pitié Salpétrière
Resp. : Dr. Marie-Claude Potier
e-mail : 
Groupe NanoSystèmes Analytiques
Institut des Sciences Moléculaires - UMR 5255 CNRS
Université Bordeaux 1 - ENSCPB
Resp. : Neso Sojic
e-mail : 
http://www.ism.u-bordeaux1.fr/
http://recherche.enscpb.fr/nsysa/home.asp
Financements :
CNano IdF 2007 - NanoFCS : Support métalliques nanostructurés pour suivi de bio-molécules uniques en concentrations élevées
ANR PNano 2009 - NABIS : Imagerie NAnométrique Biomédicale et Spectroscopie
